实验动物｜使用Tonopen眼压计测量小鼠眼压——siRNA靶向下调 RhoA基因对慢性高眼压小鼠视功能的保护作用

Issuing time:2023-08-25 12:47

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目的

探究 RNA干扰技术对青光眼视觉功能恢复的可行性。

方法

通过构建慢性高眼压小鼠模型并进行玻璃体腔注射 RhoAsiRNA(siRhoA)以干扰 RhoA的表达，分别采用闪光视觉诱发电位(f-VEP)、定量反转录聚合酶链反应 (qRT-PCR)和 Westernblot法对小鼠视觉功能、视网膜组织中 RhoA基因和 RhoA蛋白的表达情况进行检测。结果玻璃体腔注射后，siRhoA组小鼠患眼f-VEPP波、N波潜伏期和 P波振幅逐渐恢复，相较 NCsiRNA和 PBS组差异有统计学意义(P<0.05)，NCsiRNA和 PBS组小鼠患眼 f-VEP的 P波和 N波潜伏期延长，P波振幅降低(P<0.05)。此外， qRT-PCR和 Westernblot结果显示，经 siRhoA处理后，慢性高眼压模型小鼠患眼视网膜组织 RhoA基因和 RhoA蛋白表达量与对侧眼相比差异无统计学意义(P>0.05);而 NCsiRNA和 PBS组视网膜组织 RhoA基因和 RhoA蛋白表达量相较对侧眼差异有统计学意义(P<0.05)。

实验动物模型建立与分组

实验动物饲养和使用遵守“眼与视觉研究协会动物使用声明”相关规定，经河南省立眼科医院中心伦理审查委员会通过 (HNEECA-2021-1)。实验动物模型拟采用既往实验建立的方法[10]。选取21只 4~6周的 C57小鼠(雌雄各半)，随机分为 3组(A组，B组，C组)。3组小鼠以 1 g· L-1 DEX 持续低浓度点左眼 (处理眼，DEX)，右眼接受生理盐水持续点眼(对照眼，NS)。使用 Tonopen 眼压计测量小鼠眼压 。采用定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chainreaction，qRT-PCR)和 Westernblot检测第28天DEX处理眼和对照眼中 RhoA基因和 RhoA蛋白表达量。

图表